尺寸排阻色譜(Size Exclusion Chromatography,SEC),是基于體積排阻的分離機理,按尺寸分離天然及合成聚合物、生物聚合物、蛋白質(zhì)或納米顆粒的色譜技術(shù)。市場上主要品牌有TSK、Shodex等,GVS體積排阻色譜柱在質(zhì)量上同樣優(yōu)異。
如圖所示,SEC柱的填料為多孔高純硅膠或聚合物。完全不能進入填料凝膠孔徑內(nèi)的大分子,只能在填料顆粒間空隙中通過,最早流出(即全部排阻);能自由出入填料孔
內(nèi)小分子,最后流出(即全部滲透);其它分子在填料孔內(nèi)停留時間不同而按分子的大小順序分離。
因此,這些小分子在SEC柱中的保留時間較長,而大于SEC孔徑的分子,不能進入凝膠顆粒的孔內(nèi),只能從凝膠顆粒的間隙流出SEC柱,因此這些大分子在 GPC柱上的保留時間較短。
適用的溶質(zhì)分子量范圍為即為每根色譜柱的線性范圍可以查詢色譜柱對應(yīng)分子量校正曲線得到。而每根SEC柱都有其分子量排阻限 (Exclusion Limit)。分子量大到不能進入任何顆粒內(nèi)孔中的分子將會被死體積的溶液洗脫。不能進入顆粒內(nèi)孔的最小分子尺寸定義為該SEC柱的排阻限。
尺寸排阻色譜可以分為:
凝膠滲透色譜(GPC):固定相為疏水凝膠,流動相為有機溶劑,分離油溶性高聚物。
凝膠過濾色譜(GFC):固定相為親水凝膠,流動相為水溶液,分離生物高分子如蛋白質(zhì)、核酸、酶及多糖。
Gel X series of columns (Universal)
pH 范圍:2 - 8.5, 最大使用溫度為80℃,鹽濃度20mM - 2.0M,流動相為常規(guī)水相及有機相溶劑。
填料型號 | 孔徑 | 粒徑 | 蛋白分子量 | 水溶性聚合物分子量 |
polymer molecular weight | 100? | 3μm | 100 - 100,000 | 500 - 10,000 |
Gel X3015 | 150? | 3μm | 500 - 150,000 | 500 - 25,000 |
Gel X3030 | 300? | 3μm | 5,000 - 1,250,000 | 1,000 - 100,000 |
Gel X5010 | 100? | 5μm | 100 - 100,000 | 500 - 10,000 |
Gel X5015 | 150? | 5μm | 500 - 150,000 | 500 - 25,000 |
Gel X5030 | 300? | 5μm | 5,000 - 1,250,000 | 1,000 - 100,000 |
Gel X5050 | 500? | 5μm | 15,000 - 5,000,000 | 2,500 - 500,000 |
Gel X5100 | 1000? | 5μm | 50,000 - 7,500,000 | 5,000 - 1,500,000 |
Gel X5200 | 2000? | 5μm | >10,000,000 | 50,000 - >2,500,000 |
Gel S series columns (S series packing is ideal for separation of insulin, trypsin etc. hydrophobic protein, as well as monoclonal antibody protein)
pH 范圍:2 - 8.5,最大使用溫度為80℃,鹽濃度20mM - 2.0M,流動相為常規(guī)水相及有機相溶劑。
填料型號 | 孔徑 | 粒徑 | 蛋白分子量 |
Gel S3010 | 100? | 3μm | 100 - 100,000 |
Gel S3015 | 150? | 3μm | 500 - 150,000 |
Gel S3030 | 300? | 3μm | 5,000 - 1,250,000 |
Gel S5015 | 150? | 5μm | 500 - 150,000 |
Gel S5030 | 300? | 5μm | 5,000 - 1,250,000 |
Gel S5050 | 500? | 5μm | 15,000 - 5,000,000 |